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维德维康动物疫病试剂盒常见问题产生原因及解决办法

发布时间:2015-03-25      点击次数:311
  1. 目的

为了总结维德维康动物疫病试剂盒在使用过程中出现的问题、原因及解决办法,为客户解决常见问题提供技术参考,特编写此文件。

  1. 适用范围

本文件适用于维德维康动物疫病试剂盒的相关问题。

  1. 维德维康动物疫病试剂盒的常见问题

酶标板吸光值偏高及出现假阳性;

酶标板吸光值偏低及出现假阴性;

酶标板避光显色后颜色无变化;

④试验结果的重复性不好;

上述问题产生原因

解决方案

检测样本

血清发生溶血,会出现假阳性;

血清反复冻融使抗体效价下降,会出现假阴性;

血清被细菌污染后反复冻融,或使用前未混匀,会导致实验重复性差。

采集血清时应无菌操作,要求血清清亮无溶血,避免使用严重溶血的血清;

血清保存时间不能太久,血清解冻后应该充分混匀,血清稀释后在加样前也要混合均匀,解冻后的血清争取一次性检测完毕,如需做多次检测,建议少量分装冷冻保存;

若血清出现浑浊或沉淀,建议离心后取上清检测。

           试剂盒内的试剂和组分

试剂过期或者不同批号试剂盒的试剂组分混用,会使吸光值发生偏差;

试剂在使用过程中受到了污染,试剂反复回温,浓缩洗涤液结晶时没有溶解就使用;

酶标记物使用不正确或已变质均会导致实验结果不成立(避光反应后不显色)。

不要使用过期试剂和混用不同批号的试剂,避免试剂盒分多次使用;

确认酶标记物是否来源于本试剂盒,且;避免取出的试剂再倒回原瓶;不要过早将酶标记物取出;

确保使用试剂盒配套的洗涤液;浓缩洗涤液应用蒸馏水或去离子水稀释,如果有结晶要加热溶解后再使用。

            实验室环境温度控制

实验室温度过高或者过低都会导致吸光值偏差;

试剂盒回温及孵育未按规定温度及时间进行。

保持实验室温度在20-25,避免在直射光照下或者通风口旁操作;试剂盒从冰箱中取出后,需在室温下放置40min以上,使试剂盒恢复到室温再使用,使用后立即放至2-8保存;

回温及孵育的温度和时间要力求准确,孵育时酶标板不能叠放,以保证各板的温度可以平衡。

            实验人员的操作问题

在使用加样器时,操作不正确或者将加样器吸头与板孔相接触,造成污染;

洗涤液配制不正确或用了不合格的水配制,或使用了错误的洗涤液洗板,次数及方法不正确;手动洗板时用带纸屑的吸水纸拍板;吸水纸重复使用,导致酶标板污染,均会影响检测结果的准确性;

试剂添加顺序错误或遗漏了实验步骤均会导致酶标板不显色;

点板时间过长导致的加样时差也会对结果产生影响。

严格按照试剂盒提供的说明书进行操作,试剂添加的顺序和步骤要正确;

在使用加样器进行加样时,避免加样器吸头与板孔接触,取样时要更换吸头,同时要避免将样品加在孔壁上或产生气泡;检测大量样品时,应使用多道加样器分批次操作,一次只操作一块板;先将待检血清全部稀释完毕,再点板,以减少延时造成的误差;

按照规定的洗板次数洗涤,每孔加入的洗涤液不少于规定的液量,手动洗板时不用带纸屑的吸水纸拍板,并且避免吸水纸重复使用。

              仪器设备问题

酶标仪读数出现错误;

加样器长期使用因机械磨损造成加样不准;

洗板机污染,加液头堵塞等问题均会导致误差。

试验中常用到的酶标仪、加样器、洗板机、恒温箱及存放试剂的冰箱等仪器设备要定期维护和校准,确保仪器设备正常使用,避免试验误差。

  1. 建议

影响ELISA测定结果的因素较多,需加强每一个环节的质量控制,严格按照试剂盒的说明书进行操作,才会获得正确的试验结果。

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