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动物尿液中沙丁胺醇残留检测试纸条的研制

发布时间:2014-12-10      点击次数:314

动物尿液中沙丁胺醇残留检测试纸条的研制

韩京朋,吴小平,邱检萍,王照鹏,李向梅,苏丽芳,许舒婷,李诗焱,袁淑娟

(北京维德维康生物技术有限公司,北京 100095)

摘 要:为了制备可用于检测动物尿液中沙丁胺醇残留的试纸条,本研究采用胶体金免疫层析方法。首先将小分子沙丁胺醇进行了改造,并在此基础上制备了SAL抗原和抗SAL抗体,进而制备得到了胶体金标记抗体,然后将其喷涂于胶体金结合垫,并与样品垫、NC膜、吸水纸以及塑料底板组装,得到SAL检测试纸条。结果表明,试纸条对猪尿、牛尿、羊尿中SAL的检测限为3.0 μg/L,检测时间为5 min,特异性高,重复性良好,与仪器方法检测结果一致,可用于动物尿液中SAL的现场快速检测和筛选工作。

关键词:沙丁胺醇;胶体金;试纸条;检测

Research on salbutamol residue test strip in animal urine

Han Jingpeng1, Wen Kai2, Qiu Jianping1, Wang Zhaopeng1, Su Lifang1, Xu Shuting1 ,Yao Lin1

(1.Beijing WDWK Biotech Co., Ltd, Beijing, 100095;2.Department of Veterinary Pharmacology and Toxicology, College of Veterinary Medicine, China Agricultural University, Beijing100193)

Abstract:To prepared test strip that can be used to detect salbutamol residues in animal urine, Colloidal gold immunochromatography method was been adopted .First we transformed the salbutamol molecules, and prepared the antigen and anti-SAL antibody on the molecule basis, and then prepared the colloidal gold-labeled antibody, and then sprayed the labeled antibody on the gold jed pad, at last we assembled SAL test strip with the jed pad, the sample pad, the NC membrane, the water paper and plastic baseboard. The results showed that the detection limit of the strip was 3.0 μg/L for SAL in pig urine, cow urine and sheep urine , respectively, the detection time was about 5 min, high specificity, good reproducibility and the results were consistent with the instrument approach, so the strip can be used for SAL rapid testing in animal urine and screening.  

Key words:Salbutamol;colloidal gold;strip;test

沙丁胺醇(Salbutamol,SAL),化学名为1-(4-羟基-3-羟甲基苯基)-2-(叔丁氨基)乙醇,是人工合成的水杨醇类β-肾上腺素激动剂β-兴奋剂,能选择性激动支气管平滑肌的β2受体,临床上广泛用于治疗支气管哮喘[1]。由于具有促进骨骼肌生长,减少脂肪蓄积的作用,因此SAL作为促生长剂被不法分子用在畜禽生产中[2]

由于β-兴奋剂通过食物链富集,zui终蓄积人体,引起头晕、恶心、手脚震颤甚至心脏骤停等严重后果,所以世界各国都先后立法禁止在畜禽生产中使用β-兴奋剂作为饲料添加剂[3, 4]。β-兴奋剂中,克伦特罗是zui常用的饲料添加剂,国内外均已研究出快速有效的检测方法对其进行监测,使得其非法使用受到了较有效的控制,而SAL检测手段研究相对滞后,因而成为不法分子谋取经济利益的新手段[5-7]。因此,建立快速、简单、方便、有效的检测手段是控制SAL非法使用的有效手段。本研究在合成SAL抗原的基础上,制备抗SAL单克隆抗体,研制出了SAL胶体金免疫层析试纸条,该方法的建立对于保障广大消费者的切身利益和畜牧业健康发展有积极的推动作用。

1  材料和方法

1.1材料与仪器

牛血清白蛋白(BSA)、卵清蛋白(OVA)、SAL、克伦特罗(CL)等β-兴奋剂类药物标准品Sigma公司;乙二醇二缩水甘油醚、碳酸氢钠碳酸钾等试剂 北京化工试剂公司;胶体金结合垫、硝酸纤维素膜(NC膜)、样品垫等材料 上海金标生物科技有限公司;胶体金溶液、羊抗鼠二抗 自制

电子天平FA2104磁力搅拌器90-2 上海良平仪器仪表有限公司;低速离心机L500 湘仪集团; XYZ3000点膜仪 BioDot公司。

1.2 方法

1.2.1 SAL半抗原制备

称取SAL 10 mg,置于10 mL三角烧瓶中,加入浓度为3 %的碳酸氢钠水溶液5 mL,充分搅拌使其完全溶解,加入乙二醇二缩水甘油醚6.2 µL,室温搅拌反应4 h,然后将得到的混合液真空干燥,即可得到粉末状SAL半抗原。

1.2.2 SAL-BSA的制备

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