呕吐毒素残留快速检测试纸条的研制

李向梅 韩京朋 苏丽芳等

北京维德维康生物技术有限公司，北京  100095

摘要：为研制一种用于检测牛奶中呕吐毒素（deoxynivalenol，DON）残留的快速检测试纸条，试验以人工合成抗原DON-OVA和羊抗鼠二抗为原料，包被硝酸纤维膜；以抗DON单克隆抗体为原料，制备金标抗体，并冻干保存于反应板微孔中，zui终制备出可用于检测牛奶中DON残留的胶体金快速检测试纸条。结果显示，该检测试纸条检测限为100 μg/L，重复性、特异性均较好，可用于检测牛奶中DON残留。

关键词：呕吐毒素；试纸条；牛奶

青贮饲料是指经人工调剂的多汁青饲料，多用于反刍动物的冬春季节饲喂，对泌乳奶牛尤为重要(白晓燕等，2011)。但青贮饲料在储存过程中易受到霉菌毒素的污染，奶牛进食受霉菌毒素污染的饲料后，不仅会影响奶牛的生产性能，且会引起牛奶中霉菌毒素的污染，影响原料奶的安全性(王星凌等，2010；王丽芳等，2011；李笑樱等，2012)。呕吐毒素(vomitoxin)，又称脱氧雪腐镰刀菌烯醇(deoxynivalenol，DON)，是一种无色针状结晶，熔点为151～152 ℃，具有较强的热抗力，121 ℃高压加热25 min仅有少量破坏(王金全，2011；林少青等，2009)。DON具有很强的毒性，可导致动物肠功能紊乱，引起呕吐、腹泻、腹痛等症状，且对免疫系统也有影响，并具有明显的胚胎毒性和一定的致畸作用，还可能有遗传毒性(金秀娟等，2010)。1998 年，在癌症研究机构公布的评价报告中，DON被列为3 类致癌物(封薇等，2012)。目前，针对牛奶中DON的检测方法主要是仪器方法，免疫分析法还很少，且主要是进口产品(周思等，2011；郑楠等，2012)。为此，本研究拟利用胶体金免疫层析法制备可检测牛奶中DON残留的快速检测试纸条，用于基层进行大批量样品的现场快速检测，防止DON中毒事件的发生。

1  材料与方法

1.1  材料  DON、玉米赤霉烯酮、黄曲霉毒素B₁、赭曲霉毒素A标准品及牛血清白蛋白（BSA）均购自Sigma公司；硝酸纤维素膜(NC膜)、样品垫、PVC底板、吸水纸均购自上海金标生物科技有限公司；胶体金溶液、包被抗原（DON-OVA）、抗DON单克隆抗体均由北京维德维康生物技术有限公司自制。阴性牛奶样品均为市售（经ELISA试剂盒检测确定为DON阴性牛奶）。

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