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关于酶联免疫试剂盒的检测方法介绍

发布时间:2022-12-18      点击次数:54
    酶联免疫试剂盒是将已知的抗原或抗体吸附在固相载体(聚苯乙烯微量反应板)表面,使酶标记的抗原抗体反应在固相表面进行,用洗涤法将液相中的游离成分洗除。常用的ELISA(酶联免疫吸附试验)法有双抗体夹心法和间接法,前者用于检测大分子抗原,后者用于测定特异抗体。
  今天我们为大家详细解说酶联免疫试剂盒检测方法:
  首先我们要从抗体的酶标记及质量鉴定、抗原浓度的优化、洗涤液及保护液的优化、酶标抗体稀释度的优化、底物液的优化、底物作用时间的优化,然后比较结果。
  一、抗体的酶标记及质量鉴定:试剂盒收集第一峰即为酶标抗体峰。标记完后用紫外分光光度计在分别在280nm、及403nm处测定酶标记物的A值,计算免疫球蛋白量、摩尔比值、酶结合率以及标记率。
  二、包被用缓冲液及最适包被抗原浓度的优化:
  1.包被缓冲液的优化:三种缓冲液作为包被液,抗原包被浓度为5ug/ml,及2.5ug/ml,酶标抗体工作浓度为1:400及1:300,用自动酶标仪分析,选择最佳的包被缓冲液系统。
  2.最适抗原包被浓度的优化:显色的强度在一定范围内与包被的抗原量成正比,但随着包被抗原浓度的增加,显色的强度反而降低,我们选择临界包被值作为包被抗原量。
  三、封闭液、洗涤液及保护液的优化
  1.封闭液的优化:采用文献报道的方法进行封闭,其封闭液的组成为:10mM磷酸盐缓冲液含1%的牛血清白蛋白。
  2.洗涤液的配制:采用文献报道的方法配制洗涤液。
  四、酶标板保护液的优化:在封闭完后加入保护液于4℃冰箱中孵育放置一个晚上,同时与未做保护的酶标板进行对照,然后将保护的及未保护的酶标板置于37烘箱中放置15天,考察保护液对酶标板的稳定性的影响。
  五、酶标抗体稀释度、保护液的优化
  1.稀释度的优化:抗原包被浓度为4ug/ml,经孵育、洗涤后、显色终止后,用自动酶标仪分析,选择A值为1.5左右的酶标抗体稀释度为最适工作浓度。
  2.保护液的优化:适当的缓冲液以及添加无关蛋白质、糖、防腐剂以及一些含氨基的化合物等都会对对酶标抗体的活性起一定的保护作用,因此我们设计了一组保护剂用于保护酶标抗体,与未添加任何糖蛋白的酶标抗体做对照。
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